Инструкция По Определению Групп Крови
Приложение N 3 УТВЕРЖДЕНО Приказ Минздрава России от г. N 2 ИНСТРУКЦИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВО ПРИ ПОМОЩИ СТАНДАРТНЫХ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК Введение Под группами крови АВО подразумеваются различные сочетания антигенных свойств эритроцитов (агглютиногенов) и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови. Существуют два групповых агглютиногена - А и В, и два агглютинина - альфа и бета. Различные сочетания этих свойств образуют четыре группы крови: Оальфа бета(I), Абета(II), Вальфа(III) и АВо(IV). Возможны два способа определения группы крови: 1. Определение группы крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток.
Инструкция по применению. Существующие в России инструкции по определению групп крови. Существующие в России инструкции по определению групп крови. Процедура проведения исследования по определению группы крови с их помощью.
При этом способе в крови устанавливают наличие или отсутствие агглютиногенов и, исходя из этого, делают заключение о групповой принадлежности исследуемой крови. Определение группы крови перекрестным способом, т.е. Одновременно при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов. При этом способе, так же как и при первом, определяют наличие или отсутствие агглютиногенов и кроме того, при помощи стандартных эритроцитов устанавливают наличие или отсутствие групповых агглютининов. Группа крови у больных и других лиц, которым предполагается сделать переливание крови, определяется сертифицированным специалистом, имеющим специальную подготовку. Во избежание ошибки процедуру взятия крови и определения группы повторяют. Результат определения группы крови записывается в правом верхнем углу лицевого листка истории болезни с указанием даты и за подписью специалиста, производившего определение.
Группа крови у доноров определяется два раза сертифицированным специалистом: один раз при первичном обращении донора при помощи стандартных сывороток двух различных серий каждой группы; и второй раз при окончательном зачислении в доноры - перекрестным способом, т.е. Одновременно при помощи стандартных сывороток (также двух различных серий каждой группы) и стандартных эритроцитов. Результат обоих определений записывается на лицевой стороне донорского журнала (карты) с указанием даты и за подписью лиц, определявших группу крови. Примечание: При использовании изогемагглютинирующих сывороток с титром не ниже, чем 1:64, разрешается проводить первичное определение группы крови у доноров и больных одной серией сыворотки каждой группы. При повторном и перекрестном определении можно использовать также сыворотки одной серии (с титром не ниже, чем 1:64), но отличающиеся от тех серий, которые были применены при первичном определении. Специальное оснащение. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Оальфа бета(I), Абета(II), Вальфа(III) и стандартная сыворотка группы АВо(IV).
Инструкция По Определению Группы Крови Цоликлонами
Стандартные эритроциты групп О(I), А(II) и В(III). Стандартные эритроциты приготавливаются учреждениями службы крови в консервированном виде. Можно использовать и нативные свежие стандартные эритроциты, приготовленные малыми дозами в соответствии с действующей инструкцией по их изготовлению. Изотонический раствор NaCl. Белые фарфоровые или любые другие белые пластинки со смачиваемой поверхностью. Стеклянные или пластмассовые палочки для перемешивания капель крови и сыворотки.
Подготовительная работа. Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25 град. Ампулы, флаконы со стандартными сыворотками ставят в штатив с тремя гнездами (или в два штатива - при использовании двух серий сыворотки каждой группы). В левые гнезда ставят сыворотку группы Оальфа(I), в средние - сыворотку группы Абета(II) и в правые - сыворотку группы Вальфа(III).
В ампулы опускают сухие чистые пипетки. Отдельно ставят сыворотку группы АВо(IV), употребляемую в качестве дополнительного контроля (см. Раздел IV, в). Этот набор дополняют пробиркой или флаконом с изотоническим раствором NaCl. Для определения группы крови перекрестным способом кроме стандартных сывороток подготавливают также стандартные эритроциты групп О(I), А(II) и В(III).
Пробирки со стандартными эритроцитами устанавливают в маленький (на три гнезда) штатив в следующем порядке: слева - группы О(I), в середине - группы А(II) и справа - группы В(III). Для промывания стеклянных, пластмассовых палочек и пипеток подготавливают стаканы с водой и с изотоническим раствором NaCl.
Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток. На левой стороне пластинки надписывают Оальфа бетаанти-(А+В), в середине - Абета(анти-В) и справа - Вальфа(анти-А), на верхнем крае - фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови. Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки соответствующей группы. Если используют стандартные сыворотки двух различных серий каждой группы, всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: Оальфа бетаанти-(А+В), Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А). Сыворотку берут из ампулы пипеткой, которую тотчас же после того, как из нее была выпущена сыворотка, опускают в ту же ампулу с сывороткой, из которой она была взята. Кровь для исследования берут из места укола мякоти пальца или мочки уха.
Капли крови величиной приблизительно 0,01 мл последовательно наносят сухой стеклянной палочкой на пластинку, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается). Другой стеклянной палочкой перемешивают каплю крови с сывороткой группы Оальфа бетаанти-(А+В) до тех пор, пока смесь не окрасится равномерно в красный цвет. Другой стеклянной палочкой перемешивают следующую каплю крови с сывороткой группы Абета(анти-В) и так же поступают с сывороткой Вальфа(анти-А). При использовании двух серий сывороток так же делают во втором ряду. Можно перемешивать кровь с сывороткой одной и той же палочкой, но в этом случае необходимо после размешивания каждой капли промывать палочку в стакане с водой и насухо ее вытирать.
После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят на менее пяти минут. Хотя агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, наблюдение следует вести и далее - до пяти минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например, с эритроцитами группы А2(II).
Инструкция По Определению Группы Крови
По мере наступления агглютинации, но не ранее, чем через три минуты, в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора NaCl и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения пяти минут. Трактовка результатов реакции при определении группы крови при помощи стандартных сывороток Реакция гемагглютинации в каждой капле может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд от начала перемешивания в смеси появляются видимые невооруженным глазом мелкие красные комочки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие комочки постепенно сливаются в более крупные, а иногда в хлопья неправильной формы.
При этом сыворотка полностью или почти полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции жидкость все время (5 минут) остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких агглютинатов. Результаты реакций в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпадать. Результаты с сыворотками трех групп: Оальфа бетаанти-(А+В), Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А) могут дать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций (см. Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, т.е.
Все смеси остались равномерно окрашенными в красный цвет без признаков агглютинации, это значит, что кровь не содержит агглютиногенов А и В, т.е. Принадлежит к группе О(I). Если сыворотки групп Оальфа бетаанти-(А+В) и Вальфа(анти-А) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Абета(анти-В) - отрицательную, это значит, что кровь содержит агглютиноген А, т.е.
Принадлежит к группе А(II). Если сыворотки групп Оальфа бетаанти-(А+В) и Абета(анти-В) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вальфа(анти-А) - отрицательную, то исследуемая кровь содержит агглютиноген В, т.е. Принадлежит к группе В(III). Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что исследуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В и принадлежит к группе АВ (IV). Однако в этих случаях для исключения неспецифической агглютинабельности исследуемых эритроцитов необходимо провести дополнительное контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВо(IV). Для этого на пластинку наносят большую каплю (0,1 мл) сыворотки группы АВо(IV) (контроль) и к ней добавляют маленькую (0,01 мл) каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают, после чего наблюдают за результатом в течение 5 минут при покачивании пластинки.
Лишь отсутствие агглютинации в этой капле, при наличии ее в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп Оальфа бетаанти-(А+В), Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ(IV). Техника определения группы крови перекрестным способом при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов. Определение группы крови перекрестным способом заключается в одновременном определении групповых агглютиногенов в эритроцитах испытуемой крови при помощи стандартных сывороток и групповых агглютининов в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов. Для определения группы крови перекрестным способом кроме стандартных сывороток используют стандартные эритроциты группы О(I), А(II) и В(III). Кровь для исследования берут из вены или места укола пальца в сухую пробирку.
Кровь центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 минут для отделения сыворотки (для лучшего отделения сыворотки через 3-5 минут следует отделить сверток от стенок пробирки, обведя его стеклянной палочкой). Определение производят на белой пластинке, на верхнюю часть которой наносят обозначения слева направо: Оальфа бетаанти-(А+В), Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А). На верхнем крае надписывают фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови. Под соответствующими обозначениями групп крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных изогемагглютинирующих сывороток. При использовании стандартных сывороток двух различных серий каждой группы, всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: Оальфа бетаанти-(А+В), Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А). На правую часть пластинки также под соответствующими обозначениями наносят по одной маленькой (0,01 мл) капле стандартных эритроцитов в следующем порядке слева направо: О(I), А(II) и В(III). Из пробирки, содержащей кровь больного, пипеткой извлекают сыворотку (острожно, чтобы не взболтать эритроциты) и накапывают ее по одной большой (0,1 мл) капле на подготовленные стандартные эритроциты.
После этого той же пипеткой набирают со дна пробирки эритроциты испытуемой крови и наносят их по маленькой (0,01 мл) капле рядом с каждой каплей подготовленной стандартной сыворотки. Во всех каплях сыворотку тщательно перемешивают с эритроцитами (сухой стеклянной палочкой), пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят не менее пяти минут. Агглютинация в каплях со стандартной сывороткой обычно начинается быстро (10-30 секунд).
Агглютинация в каплях, в которых сыворотку крови испытывают со стандартными эритроцитами, может наступить поздно (к концу пятой минуты), в связи с возможностью низкого титра содержащихся в исследуемой сыворотке агглютининов. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 минуты, в те капли, в которых она наступила, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора NaCl и продолжают наблюдение при покачивании пластинки до истечения пяти минут. Трактовка результатов при определении группы крови перекрестным способом Учет реакции производится путем сопоставления результатов, полученных при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов (см. Результаты реакций, полученных при помощи стандартных сывороток и стандартных эритроцитов, должны совпадать, т.е. Указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной и той же группе крови. Эти результаты могут быть выражены в четырех различных комбинациях. Реакция со стандартными сыворотками указывает на отсутствие групповых агглютиногенов, т.е.
На принадлежность исследуемой крови к группе О(I) (см. Раздел IV, а). При этом сыворотка исследуемой крови (нижний ряд) дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами группы О(I) и положительную - с эритроцитами групп А(II) и В(III).
Это указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов альфа и бета, т.е. Подтверждает принадлежность исследуемой крови к группе Оальфа бета(I). При помощи стандартных сывороток в исследуемой крови устанавливается наличие агглютиногена А (см. Раздел IV, б). При этом сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами групп О(I) и А(II), но положительную с эритроцитами группы В(III).
Это указывает на наличие в исследуемой крови агглютинина бета, т.е. Подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе Абета(II). При помощи стандартных сывороток в исследуемой крови определяется наличие агглютиногена В (раздел IV, в). При этом сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами групп О(I) и В(III), но положительную с эритроцитами группы А(II). Это указывает на наличие в исследуемой крови агглютинина альфа, т.е. Подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе Вальфа(III).
При помощи стандартных сывороток в исследуемой крови устанавливается наличие агглютиногенов А и В, а исследование с контрольной сывороткой группы АВ(IV) подтверждает специфичность реакции (см. Раздел IV, г). При этом сыворотка исследуемой крови дает отрицательную реакцию со стандартными эритроцитами всех трех групп, что указывает на отсутствие агглютининов в исследуемой крови, т.е. Подтверждает принадлежность испытуемой крови к группе АВо(IV). Причины ошибок и меры их предупреждения Отступление от изложенных правил может привести к ошибочным заключениям о групповой принадлежности исследуемой крови.